登革熱檢測(cè)試劑（elisa)

Panbio Dengue IgM Capture ELISA

產(chǎn)品目錄號(hào) 01PE20

預(yù)期用途

Panbio Dengue IgM Capture ELISA 用于定性檢測(cè)血清中登革熱病原的 IgM 抗體，輔助臨床實(shí)驗(yàn)室診斷出現(xiàn)登革熱病毒臨床癥狀的患者。Panbio Dengue IgM Capture ELISA 應(yīng)該與其它登革熱血清測(cè)試聯(lián)用。

概述

登革熱病毒是黃病毒屬，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。通過(guò)蚊子傳播，主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊。登革熱病毒感染可導(dǎo)致一系列的臨床癥狀，從不明顯的癥狀到致死性的出血性疾病。典型登革熱或斷骨熱的特征是突然發(fā)熱、劇烈頭痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛和皮疹。雙相發(fā)熱病程常見(jiàn)失眠和厭食，失去味覺(jué)或口苦。登革出血熱和登革休克綜合征都是嚴(yán)重的并發(fā)癥，通常與感染第二種血清型有關(guān)。利用 ELISA 方法檢測(cè)登革熱病毒的 IgM 抗體是非常重要的程序，尤其是對(duì)于繼發(fā)性登革熱病毒感染，繼發(fā)性感染患者并發(fā)癥的發(fā)生幾率較高。盡管檢測(cè)水平在感染后八個(gè)月仍存在，登革熱出現(xiàn)三至五天后便可檢測(cè)到血清 IgM 抗體且通常可持續(xù) 30-90 天。

檢測(cè)原理

血清中存在的登革熱病毒 IgM 抗體，與微孔測(cè)試條上聚苯乙烯表面附著的抗人 IgM 抗體結(jié)合。用抗原稀釋劑將濃縮的登革熱 1-4 型抗原溶液稀釋到正確的工作容積。用昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生抗原，用特異性單克隆抗體純化抗原。在稀釋后的抗原中添加等體積的辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記單克隆抗體（MAb），形成抗原 MAb 復(fù)合物。清洗測(cè)定板上的剩余血清，將抗原 MAb 復(fù)合物添加到測(cè)定板中。在培養(yǎng)完成后清洗微孔，再添加無(wú)色的底物系統(tǒng)- 四甲基聯(lián)苯胺/過(guò)氧化氫（TMB 顯色液）。底物被酶水解后，顯色液變藍(lán)。用酸終止反應(yīng)后，TMB 變黃。顯色表示測(cè)試樣本中存在抗登革熱 IgM 抗體。

提供的材料

注意：01PE21 =01PE20x5

• 抗人 IgM 包被微孔板-（12x8 孔）微孔板由抗人IgM 抗體包被。即用型。未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 登革熱 1-4 型抗原（重組） - 1 瓶，無(wú)色瓶蓋，包含 150μL（藍(lán)色）濃縮的 1 型、2 型、3 型和 4 型登革熱病毒抗原。未使用的稀釋抗原必須丟棄。濃縮抗原在有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 清洗緩沖液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20 和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結(jié)晶。若去除結(jié)晶，可在 37℃孵育液體至澄清。混合均勻。用 19 體積的蒸餾水稀釋 1 體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在 2-25℃儲(chǔ)存一周。

4.  樣本稀釋劑– 2 瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris 緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

5. 抗原稀釋劑 – 1 瓶，50mL（無(wú)色）。即用型。磷酸鹽緩沖液，含防腐劑（0.1% Proclin™和 0.005%

慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

6.  HRP 標(biāo)記單克隆抗體示蹤劑 – 1 瓶，7mL（黃色）。即用型。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記單克隆抗體示蹤劑，含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩(wěn)定劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

7.  TMB 顯色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和過(guò)氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

8.  陽(yáng)性質(zhì)控品– 1 瓶，黑色瓶蓋，200μL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

9.  校準(zhǔn)品– 1 瓶，橙色瓶蓋，400μL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

10.  陰性質(zhì)控品– 1 瓶，白色瓶蓋，200μL 人血清（含 0.1%疊氮話鈉和 0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-8℃可保持穩(wěn)定。

11. 終止液 – 1 瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于 2-25℃可保持穩(wěn)定。

Proclin™ 300 是 Rohm 和 Haas 公司的注冊(cè)商標(biāo)。

需要但未提供的材料

1. 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL 容積）

2. 去離子水

3. 標(biāo)板清洗系統(tǒng)

4. 酶標(biāo)儀，含 450nm 濾波器

5. 計(jì)時(shí)器

6. 刻度量筒

7. 燒瓶

8. 試管或微滴定板，用于稀釋血清

9. 稀釋抗原的玻璃管或塑料管

注意事項(xiàng)

用于體外診斷

1. 在制備質(zhì)控品的過(guò)程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過(guò)人類免疫缺陷病毒 1/2（HIV 1/2）抗體、丙肝

（HCV）和乙肝表面抗原的檢測(cè)，結(jié)果為陰性。但是，任何測(cè)試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原都應(yīng)按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預(yù)防中心以及美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級(jí) ¹ 處理。

2. 該測(cè)試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標(biāo)本基質(zhì)的方法。

3. 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現(xiàn)溶血或微生物生長(zhǎng)的血清。

4. 不可加熱，否則血清將失去活性。

5. 在開(kāi)始檢測(cè)前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測(cè)受溫度變化的影響。微孔板在達(dá)到室溫

（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。

6. 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導(dǎo)致污染。

7. 未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。 否則將產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。

8. 底物系統(tǒng)：

(a) 由于 TMB 易受金屬離子的污染，所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。

(b) 避免長(zhǎng)時(shí)間陽(yáng)光直射。

(c) 有些清潔劑可干擾 TMB 的性能。

(d) TMB 可能呈現(xiàn)淡藍(lán)色，這不影響底物的活性或測(cè)定結(jié)果。

9. 某些試劑盒組成包含疊氮話鈉，疊氮話鈉可能與鉛或銅管反應(yīng)形成極易爆炸的金屬疊氮化合物。通過(guò)管道裝置處理這些試劑時(shí)，請(qǐng)用大量清水沖洗以避免疊氮化物在排水管內(nèi)累積。

疊氮話鈉還抑制酶標(biāo)物的活性。在添加酶標(biāo)物時(shí)必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。

登革熱檢測(cè)試劑（elisa)